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オリゴ核酸の受託合成
siRNA
siRNA（カラム精製品）
低価格、ベーシックなカラム精製の siRNAセット（sense鎖＋antisense鎖）です。
設計サービスと合わせてご利用いただく方も多いです。
セット内容 |
sense 鎖、antisense 鎖（19 mer RNA + 2 mer DNA）各1本 （5xアニーリングバッファー、RNAase-free water を同梱） ※ご指示がなければアニーリングせずにお送りしております。 アニーリング済みの納品をご希望の場合はその旨を明記ください。 アニーリングについて |
|---|---|
価格 |
17,600円（税込） （sense鎖、antisense鎖 各8,800円（税込）） ※鎖長が長くなると追加料金（440円／mer）が加算されます。 ※修飾品は別途修飾料金が加算されます。 ※3セット以上同時にご注文の場合は10％OFFとなります。 （修飾品やALLRNA配列は割引対象外） |
収量 |
sense鎖、antisense鎖 各 3 ODU～ （保証収量：各3 ODU） |
納期 |
標準納期：5日間 ご依頼本数が多い場合や、アニーリングが必要な場合は、追加で日数をいただきます。 また、受注状況や合成状況により前後します。 |
その他 |
・合成報告書添付 ・ESI-MSによる品質分析チャート添付 |
siRNA（HPLC精製品）
より高純度のsiRNAをご希望の場合 HPLC精製品をおすすめいたします
セット内容 |
sense鎖、antisense鎖（19merRNA+2merDNA）各1本 （5xアニーリングバッファー、RNAase-free water を同梱） ※ご指示がなければアニーリングせずにお送りしております。 アニーリング済みの納品をご希望の場合はその旨を明記ください。 アニーリングについて |
|---|---|
価格 |
22,000円（税込） （sense鎖、antisense鎖 各11,000円（税込）） ※鎖長が長くなると追加料金（440円／mer）が加算されます。 ※修飾品は別途修飾料金が加算されます。 ※3セット以上同時にご注文の場合は10％OFFとなります。 （修飾品やALLRNA配列は割引対象外） |
収量 |
sense鎖、asntisense鎖 各1 ODU～（保証収量：各1 ODU） |
納期 |
約７営業日 ご依頼本数が多い場合や、アニーリングが必要な場合は、追加で日数をいただきます。 また受注状況や合成状況により前後します。 |
その他 |
・合成報告書添付 ・HPLC分析チャート添付 ・ESI-MSによる品質分析チャート添付 |
アニーリングについて
弊社では 基本アニーリングせずに乾燥状態でお送りしております。
合成できたものを調整せずにすべてお送りしますので、それぞれの収量は多くお送りできます。
ご自身で濃度調整をして、アニーリングしていただく手間はございますが、
ご自身でアニーリングすることに抵抗がない方、少しでも収量が欲しい方にはおすすめです。
参考：アニーリング方法
追加料金なしでアニーリング済み（溶解品）で納品することも可能です。
アニーリング済みでの納品をご希望の場合は、ご注文の際、ご指示ください。
20uM溶解品にてお届けになります。（異なる濃度など何かご指定があればお知らせください。）
アニーリング済みのメリットは、ご自身でアニーリングする手間が省けます。
収量は カラム精製の場合、通常15nmol～25nmol程度となります。収量よりも手軽さを重視される方にはおすすめです。
siRNA：カラム精製品とHPLC精製品の違い
カラム精製品は、HPLC精製品に比べ、安価で納期が早いという利点があります。
siRNAの場合、鎖長がそれほど長くない為、カラム精製品でもある程度の純度は確保されますが、欠損体などの不純物を除くことができない場合があります。
siRNAの発現抑制の効果を厳密に比較又は定量したいという場合には、HPLC精製品をお勧めします。
見積書・納品書・請求書のsiRNAの明細表記について
弊社の見積書・納品書・請求書は、sense鎖、antisense鎖それぞれ1本として表記しております。
Ex: siRNA 2本16,000円（税抜）
合計17,600円（税込）
アニーリング済のご注文の場合、実際は、アニーリングされて1本での納品になる場合も上記のような表記となっていますので、ご了承ください。
siRNA 多本数同時ご注文割引
3セット以上同時注文で10％引となります。
OffTargetに対しても発現抑制効果が生じる問題を回避する方法として、複数のsiRNAを同時に使用し、目的遺伝子に対する相対的な効果を高めることが有効です。ご活用ください。
※修飾品やALLRNA配列は割引対象外となります。
収量増加
siRNAをそれぞれ1ODUずつ使うことによって、3.5cmディッシュの培養細胞に約25回トランスフェクションすることが可能です。
必要収量が多い場合は、ご希望の収量をお知らせください。
セット保証収量と価格
※塩基数が異なる場合や、特殊修飾がある場合は、価格が異なります。
カラム精製品
19mer RNA+2merDNA（21mer、修飾なし）S鎖AS鎖2本セットの場合
セット保証収量 |
価格(税込） |
価格比 （対 標準スケール品） |
|---|---|---|
標準スケール品 6 O.D. (S鎖 AS鎖各3 O.D.) |
17,600 円 |
1.0 |
40 O.D. (S鎖 AS鎖各20 O.D.) |
35,200 円 |
2.0 |
60 O.D. (S鎖 AS鎖各30 O.D.) |
52,800 円 |
3.0 |
HPLC精製品
保証収量と価格：19merRNA+2merDNA（21mer、修飾なし）2本セットの場合
セット保証収量 |
価格(税込） |
価格比 （対 標準スケール品） |
|---|---|---|
標準スケール品 2 O.D. (S鎖 AS鎖各1 O.D.) |
22,000 円 |
1.0 |
20 O.D. (S鎖 AS鎖各10 O.D.) |
55,000 円 |
2.5 |
40 O.D. (S鎖 AS鎖各20 O.D.) |
88,000 円 |
4.0 |
さらに大容量スケールの合成にも対応いたします。お気軽にお問合せください。
siRNAの修飾標識品 一例
Transfection 効率 の向上
Cholesterol 修飾
説明 |
価格 （標識追加料金） |
試薬情報 |
|---|---|---|
3'末端にCholesterolを挿入する方法がよく使われています。 |
3'-Cholesteryl-TEG お問合せください |
Glen 20-2975 |
5'末端にも可能です。 |
5'-Cholesteryl-TEG お問合せください |
Glen 10-1976 |
α-Tocopherol修飾
説明 |
価格 （標識追加料金） |
試薬情報 |
|---|---|---|
VitaminEであるTocopherolを末端修飾する方法が有効です。 |
a-Tocopheryl-TEG お問合せください |
Glen 10-1977 |
Transfection効率の向上
蛍光修飾
説明 |
価格 （標識追加料金） |
試薬情報 |
|---|---|---|
sense鎖5'末端に蛍光標識する方法が一般的です。 基本的にはDNA修飾に用いる各種試薬が使用可能です。 当ウェブサイトに掲載のない蛍光修飾も多数ございます。 |
お問合せください |
標識追加料金は基本的にDNAの修飾料金の1.2倍となります。 見積詳細はお問合せください。参考：各種修飾 |
※その他、各種修飾が可能です
siRNA保存方法
長期間使用しないオリゴは小分けにして乾燥し、-80℃以下で保存してください
siRNA アニーリング方法
※実験にはRNasefreeの水およびバッファーを使用してください。
※RNaseの混入を避けるため、チップ及びチューブは、RNaseFreeの新品チップ及びチューブを使用してください。
RNAサンプルをそれぞれRNasefreeの水で50μM（50pmol/μL）に希釈してください。
乾固したRNAは、DNAと違って水に溶けにくい性質があります。
ボルテックスミキサーや超音波洗浄機を使用して、十分に溶解してください。
※RNase-freeの条件であれば、溶解は室温でも構いませんが、RNaseの混入の恐れがある場合は、チューブを氷上で冷却しながら溶解してください。（温めると、分解の恐れが高くなります）
※カラム精製品には、カラムから脱落した浮遊物が混入してしまう場合があります。軽く遠心して、白い浮遊物を取り除いてご使用ください。
※実験に使用する前日に一度凍結し、当日融解することによって溶けやすくなる場合がありますRNAサンプル(各30μL）と、5×annealingbuffer*(15μL）を混合してください。（Total75μL）
※残ったRNAは、長期間使用しない場合、小分けにして乾燥し、-80℃で保存してください。
（1～2週間以内に使用する場合は、溶液のまま-20℃で保存してください。）2の混合溶液を90℃で1分間加熱し、スピンダウン後に37℃で60分間静置してください。
オリゴは2本鎖になり、最終濃度は20μM（20pmol/μL）になります。
溶液は-20℃で保存してください。
また、アニーリング後の凍結融解は5回以内にしてください。
接着性細胞のsiRNAトランスフェクション方法
細胞のプレーティング
トランスフェクションをする前日に、細胞を3.5cmプレートに播き、一晩培養(37℃、5%CO2)してください。
※細胞量は、20-50%コンフルエントにしてください。siRNAdilutionの調製
アニーリングした20μMsiRNA(10μL)をOpti-MEMmedium(170μL)で希釈してください。TransfectionReagentの調製
OligofectAMINE(4μL、Invitrogen社)をOpti-MEMmedium(16μL)で希釈し、室温で5～10分間静置してくださいsiRNAdilutionをTransfectionReagentに加え、軽く混合し、室温で15～20分間静置してください。
※混合の際、ボルテックスは使用しないでください。細胞をOpti-MEMで洗浄後、Opti-MEMを800μL加えてください。
4のTransfectionmixtureを細胞に加え（Total1mL）、軽く混合してください。
（siRNA最終濃度は200nM。20nM程度でも同等の効果が得られる場合があります。）37℃、5%CO2条件で、4時間培養後、血清を300μL加えてください。
2～4日目に細胞を回収し、目的遺伝子の発現をウエスタンブロットやRT-PCRで調べてください。
（一般には、24～72時間後に最も強く発現の抑制がかかります。）
※注意
遺伝子発現抑制効果は、トランスフェクションの2日後から1週間程度継続します。
さらに長期間RNAiを行う場合は、siRNAのトランスフェクションを繰り返すか、siRNA様遺伝子の発現ベクターを、培養細胞にstabletransfectionする方法があります。
後者の実験の際、アダプターDNAのベクターへのクローニングには、5'リン酸化オリゴをお試しください。 （クローニング効率が上昇します。）
※細胞内でsiRNAを発現するベクターも市販されています。（2002年11月）
pSilencer1.0-U6（U6プロモーターあり、薬剤耐性マーカーなし、Ambion社）。
pSUPER（H1プロモーターあり、薬剤耐性マーカーなし、OligoEngine社）など。
浮遊性細胞K562株へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクション条件
1. 細胞をまいて一晩培養してください。
2. 翌日遠心して回収し、無血清培地に置換してください
3. 96ウェルプレートの1ウェルあたり、1,200細胞、200ｎMオリゴ、0.6μLOligofectAMINEを使用してください。
（96ウェルプレートの1ウェルあたり、接着性細胞のプロトコールの1/10量を使用してください。）
4. その他は、接着性細胞のプロトコールと同様に実験を行ってください。
ご注文方法
3セット以上同時にご注文で10％引き価格で提供させていただきます。※特殊修飾品は除く
① sense 鎖とantisense鎖の両方の配列を明記してください。
※5'→3'の順に記入し、3'側に”dTdT”等オーバーハングも記載してください。
※sense 鎖と antisense 鎖は、オーバーハングを除いて 相補となる必要があります。配列間違いのないようご確認ください。
②精製方法
カラム精製、HPLC精製のいずれかをご指示ください。
③両鎖アニーリングしたものを希望の場合はその旨 明記ください。
アニーリングし 20μM濃度の液体状態でお送りいたします。
ご指示がなければ、アニーリングせずに乾燥状態でお送りしております。 （アニーリングバッファーおよび水は添付有）
siRNA配列の設計サービスについて
siRNAをご注文いただく方に、siRNA配列の設計サービス（無料）を提供しております。
設計をご希望の方はGenbankのaccessionnumber及び関連情報を、【order@jbios.co.jp】までお知らせください。
弊社で独自に設計し、ご提案させていただいています。